Introdução à Técnica de CRISPR

Esta obra vislumbra o universo de CRISPR e propicia uma perspectiva especialmente ampla, abordando: introdução (histórico, função biológica e evolução do sistema CRISPR); mecanismo básico
de ação da técnica (Cas9, gRNA, PAM, efeitos gerais da clivagem do alvo, vias de HDR e NHEJ); sua versatilidade (edição do DNA, regulação da expressão gênica, marcação de DNA, clivagem de RNA, mapeamento de genes, RNA tracking); aplicações; comparação com outras técnicas de nocauteamento
(RNAi, gene targeting, ZFNs e TALENs); variantes naturais e artificiais de Cas9 e gRNAs (Cas9 clássica, nickases, Cas9 de alta precisão, dead CAs9 e Cpf1); formas de obtenção de Cas9 e gRNAs (vetores, mRNAs, proteínas, desenho de gRNAs e bibliotecas); controles experimentais; ensaios moleculares para confirmação da edição genética; efeito mosaico; métodos para o uso de CRISPR em diversos modelos (bactérias, leveduras, fungos, plantas, animais e células humanas); otimização da técnica (inibição de NHEJ, multiplexing, Mutagenic Chain Reaction, espécies transgênicas para Cas9); questões éticas, legais, ambientais de pioneirismo e além.

Biologia